流感病毒H5N1亞型核酸檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)
對(duì)樣本中流感病毒H5N1亞型RNA進(jìn)行檢測(cè),適用于流感病毒H5N1型感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查。
對(duì)樣本中流感病毒H5N1亞型RNA進(jìn)行檢測(cè),適用于流感病毒H5N1型感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查。
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:流感病毒H5N1亞型核酸檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)
【包裝規(guī)格】
50人份/盒
【預(yù)期用途】
對(duì)樣本中流感病毒H5N1亞型RNA進(jìn)行檢測(cè),適用于流感病毒H5N1型感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)結(jié)合Taqman技術(shù),對(duì)禽流感病毒H5N1亞型的特異性核酸片段進(jìn)行熒光PCR檢測(cè)。
【主要成分】
組分成分 | 50人份/盒 | 主要成分 | |
規(guī)格 | 數(shù)量 | ||
PCR反應(yīng)液 |
884μL /管 |
1管 | 引物、探針、脫氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、緩沖體系 |
酶混合液 | 156μL /管 | 1管 | Taq酶、MMLV酶 |
陽性對(duì)照 | 200μL /管 | 1管 | 含目的片段的質(zhì)粒 |
陰性對(duì)照 | 500μL /管 | 1管 | 無核酸酶水 |
【儲(chǔ)存條件及有效期】
試劑置于-30~-15℃避光保存,有效期為12個(gè)月。本產(chǎn)品反復(fù)凍融應(yīng)不超過5次。
【適用儀器】
熒光定量PCR儀:ABI 7500熒光PCR儀.;ABI Quantstudio5 ;Gentier 96R;SLAN-96P全自動(dòng)醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)。
【樣本要求】
1. 適用樣本
咽拭子:應(yīng)使用專用采樣拭子,適度拭抹咽后壁和兩側(cè)扁桃體部位;迅速將拭子放入標(biāo)本采集管中,旋緊管蓋并密封,以防干燥。
全血:疑似感染動(dòng)物的靜脈血2mL至EDTA-2Na抗凝管,8000rpm離心2min,取適量上清液于1.5mL滅菌離心管中。
2. 樣本運(yùn)輸和保存
上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長(zhǎng)期保存可置-70℃,但不能超過6個(gè)月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用2~8℃冰袋運(yùn)輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。
【檢驗(yàn)方法】
1. 樣本處理
取待測(cè)樣本200ul,按照核酸提取試劑盒說明書進(jìn)行核酸提取。
2. 試劑配置(在準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行,與擴(kuò)增區(qū)分開,冰上操作)
注:試劑使用前要完全解凍,使用前渦旋混勻,10000 rpm離心5 s,確保試劑完全離心至管底,否則會(huì)出現(xiàn)裝量差異的現(xiàn)象。
若有N個(gè)待檢測(cè)樣本,則需配置N+2擴(kuò)增反應(yīng)(待檢樣本數(shù)N+1個(gè)陽性質(zhì)控品+1個(gè)陰性質(zhì)控品),按下表要求進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)液的配制,配制完成后充分震蕩混勻,10000 rpm離心5 s。按每管20μL分裝至0.2 ml PCR管中,并做好標(biāo)記,擴(kuò)增反應(yīng)液需現(xiàn)配現(xiàn)用。
N人份(μL) | |
PCR反應(yīng)液 | (N+2)×17 |
酶混合液 | (N+2)×3 |
總量 | (N+2)×20 |
3. 加樣(在樣品處理區(qū)進(jìn)行,冰上操作)
按陰性質(zhì)控品、待測(cè)樣品、陽性質(zhì)控品的加樣順序,分別取5μL,加入至已分裝擴(kuò)增反應(yīng)液的八聯(lián)管中,反應(yīng)總體系為25μL。蓋緊管蓋,短暫離心后置于熒光定量PCR儀中,并記錄樣本擺放順序。
4. 擴(kuò)增反應(yīng)(在擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行)
選擇FAM通道檢測(cè)H5亞型,選擇HEX通道檢測(cè)N1亞型。按以下擴(kuò)增程序表設(shè)置PCR擴(kuò)增參數(shù)。
步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) | |
1 | 逆轉(zhuǎn)錄 | 50℃ | 10min | 1 |
2 | 預(yù)變性 | 95℃ | 3min | 1 |
3 | 變性 | 95℃ | 10sec | 45cycle |
4 | 退火延伸及熒光檢測(cè) | 55℃ | 30 sec | |
報(bào)告熒光:FAM、HEX;淬滅熒光:NONE。 |